بیشترین غلظت نانو ذرات نقره + بیشترین غلظت عصاره گیاه
۳-۲-۱۷- بررسی حداقل غلظت مهار کنندگی رشد (MIC) به روش رقیق سازی در میکروپلیت
در این تحقیق برای تعیین MIC^[45] از روش Broth microdilution استفاده شد. علت نامگذاری این روش به این دلیل است که فقط حجم کمی از محیط براث معادل Lµ ۱۰۰ در هر یک از چاهک­های استریل میکروپلیت قرار می­گیرد.

با توجه به اینکه اولین غلظت عصاره mg/ml100 بود پس اولین غلظت در چاهک میکروپلیت هم باید همین باشد. بنابراین ابتدا mg 200 از عصاره وزن شد و درml 1 حلال ۱۰% DMSO کاملاً حل شد و غلظت mg/ml200 به دست ­آمد. در تمام چاهک­های میکروپلیت Lµ ۱۰۰ محیط کشت مولر هینتون براث ریخته شد. از غلظت mg/ml200 به میزان Lµ۱۰۰ به چاهک اول انتقال داده شد. غلظت به دست آمده mg/ml100 بود. از این چاهک Lµ۱۰۰ برداشته و به چاهک دوم انتقال شد. همینطور این روند ادامه شد تا چاهک آخر و از آن Lµ۱۰۰ دور ریخته شد. از سوسپانسیون میکروبی معادل نیم مک فارلند که قبلاً از کشت ۲۴ ساعته آماده شده بود به هر کدام از چاهک­ها Lµ۱۰۰ اضافه شد.
با توجه به اینکه اولین غلظت اسانس mg/ml200 بود. جهت تعیین MIC اسانس ابتدا ۴/۰ سی سی از اسانس معادل Lµ۴۰۰ به ۱ میلی­لیتر حلال ۱۰% DMSO اضافه شد و غلظت mg/ml400 به دست آمد. به تمام چاهک­ها Lµ۱۰۰ محیط کشت مولر هینتون براث اضافه شد. از غلظت mg/ml400 به چاهک اول انتقال داده شد و بنابراین غلظت mg/ml200 بدست آمد. سپس از این چاهک Lµ۱۰۰ به چاهک بعدی انتقال داده شد و این کار ادامه داده شد تا آخرین چاهک و از آن Lµ۱۰۰ دور ریخته شد. به تمام چاهک­ها Lµ۱۰۰ سوسپانسیون میکروبی معادل نیم مک فارلند اضافه شد.
برای تعیین MIC نانو ذرات نقره نیز مانند موارد دیگر عمل شد در تمام چاهک­ها Lµ ۱۰۰ محیط کشت مولر هینتون براث ریخته شد. از محلول نانو ذرات نقره با غلظت µg/ml 8000 به میزان Lµ۱۰۰ به چاهک اول اضافه شد و غلظت µg/ml 4000 به دست ­آمد. از این چاهک Lµ۱۰۰ برداشته و به چاهک بعدی اضافه شد و تا چاهک آخر همین روند ادامه داده شد و از آخری Lµ۱۰۰ دور ریخته شد. در نهایت به تمام چاهک­ها Lµ۱۰۰ از سوسپانسیون میکروبی معادل نیم مک فارلند اضافه شد.
غلظت هر کدام از عصاره­ها، اسانس ­ها و نانو ذرات نقره در هر چاهک به ترتیب جدول ۳-۱ خواهد بود.
جدول ۳-۱- غلظت عصاره، اسانس و نانو ذرات نقره در چاهک های میکروپلیت